小时)。
然后,合并提取液,减压浓缩,得浸膏213克,加水溶解,石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3次,减压回收溶剂。
得到石油醚部位15克、氯仿部位15克、乙酸乙酯部位27克、正丁醇部位42克
。氯仿部位以氯仿一甲醇梯度洗脱,得到药物标志物1—3,经反复硅胶柱层析,分别得到化合物9(10毫克)、1(14毫克)、6(24毫克)。
乙酸乙酯部位以石油醚-丙酮梯度洗脱,得到流份实验标志物1~4,其中实验标志物1步硅胶柱层析,得到化合物1(65毫克)。
实验标志物3经反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱纯化,得到化合物7(35毫克)和8(26毫克)。
正丁醇部位以氯仿一甲醇梯度洗脱,得到流份实验标志物1~4,其中实验标志物1经反复硅胶柱层析,得到化合物5(51毫克)。
实验标志物4上ODS柱,甲醇一水梯度洗脱,再经Sephadex LH-20凝胶柱纯化,得到化合物2(42毫克)、3(57毫克)、4(73毫克)。
既然我觉得它有用,那么我们采用抗肿瘤活性实验法进行实验。
首先,细胞接种用含百分之10胎牛血清的RPMI1640培养液培养MNK-45和SGC一7901,收集对数生长期细胞,消化后调整其悬液浓度,以每孔1×104个细胞接种于96孑L板,每孔200 trL。
细胞培养将细胞板放人CO:孵箱中,在37摄氏度、百分之5CO,条件下培养24 小时,当细胞达到80%~90%汇合度时,弃去培养基。
接下来,就是细胞给药。
我们将将样品用DMSO溶解后,按200、100、50、25、12.5克/毫升质量浓度加人细胞孔内,重复3批,并另加3孔作为阳性对照(5-氟尿嘧啶)组。
3孔作为DMSO对照组,每孔总体积100止,在酶联免疫检测仪上测定各孑L吸光度,计算细胞抑制率、
公式为抑制率=(1一加药细胞吸光度/对照细胞吸光度)×100%。再采用Logit法计算IC。
然后是实验结果。
结构鉴定分别有化合物1:白色无定形粉末(甲醇)。
化合物2:白色粉末(氯仿),化合物3:针状结晶(甲醇)。化合物4:黄色粉末(甲醇)。化合物5
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